蟾酥及其制剂的含量测定方法很多，如分光光度法、薄层扫描法、差示光度法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
分光光度法
称取蟾酥适量，置索氏提取器中，加氯仿回流提取 5 小时，挥干氯仿。残渣分为二份，一份以乙醇溶解定容；另一份加 4％ NaOH 溶液 2mL，并用乙醇稀释至刻度，摇匀，室温下放置 30 分钟后于 360nm 分别测定两份溶液的吸收度，计算△ A，由回归方程计算含量。
取蟾酥约 0.5g，于 80℃干燥 2 小时，研成细粉，精密称定，加海砂 5g，混匀，置索氏提取器中，加氯仿适量，提取4 小时，回收氯仿，残留物加乙醇适量使溶解，滤过，滤液移至 100mL 量瓶中，用少量乙醇分数次洗涤滤器，洗涤液并入量瓶中并加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取 lmL置 25mL 量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，在 299nm 波长处测定吸收度，按脂蟾毒配基 (C24H3204) 的吸收系数 E ；兰为 154 计算，即得。
薄层扫描法
薄层扫描法应用较广，常用硅胶 G 板，丙酮 - 氯仿 -环己烷展开系统，在 λS300nm，λR340nm 处进行反射式锯齿扫描。可测定脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵、蟾毒它灵、远华蟾毒精及日蟾毒它灵等多种成分。
气相色谱法
用气相色谱法测定蟾酥及其制剂的样品需进行适当的预处理，如将样品提取液先经过柱层析或薄层层析后，方可进行气相色谱测定，采用 FID 检测器，内标法或外标法定量。
高效液相色谱法
蟾酥中含有的蟾蜍笛二烯类、强心甾烯蟾毒类和吲哚碱类成分，都具有紫外吸收，可用高效液相色谱法测定。如《中
国药典》2005 年版蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基就是用高效液相色谱法测定。
